NobleRyder 紫外法蛋白定量試劑盒
NobleRyder 紫外法蛋白定量試劑盒 NobleRyder 即用型液體試劑 P2815-250TNobleRyder 即用型液體試劑 P2815-500T
紫外法蛋白定量試劑盒
產(chǎn)品簡介：
蛋白質分子中存在含有共軛雙鍵的lao氨酸、se氨酸、苯bing氨酸，使蛋白質在270～290nm波長范圍內(nèi)具有吸收紫外光的性質，其中l(wèi)ao氨酸的最大吸收峰為275nm，se氨酸的最大吸收峰為280nm，苯bing氨酸的最大吸收峰為257nm。在上述波長范圍內(nèi)，蛋白質溶液的吸收值與其濃度呈正比，可作定量測定。
NobleRyder 紫外法蛋白定量試劑盒優(yōu)點是：操作迅速、簡便，不易受低濃度鹽類的干擾；缺點是與標準蛋白中l(wèi)ao氨酸、se氨酸含量差異較大的蛋白質，準確性較差。樣品中含有嘌呤、嘧啶及核酸會干擾檢測結果。
NobleRyder 紫外法蛋白定量試劑盒
產(chǎn)品組成：
編號 名稱 | P2815 250T | P2815 500T | Storage |
試劑(A): 蛋白稀釋液(10×) | 50ml | 100ml | RT |
試劑(B): 蛋白標準(BSA) | 2×20mg | 3×20mg | RT |
使用說明書 | 1份 | ||
自備材料：
1、 分光光度計或酶標儀
2、 96孔板或離心管
操作步驟(僅供參考)：
1、 用去離子水或蒸餾水稀釋蛋白稀釋液(10×)至1×，即為蛋白稀釋工作液。取1支20mg的蛋白標準，加入20ml蛋白稀釋工作液，即配制成蛋白標準(1mg/ml)，-20℃保存。
2、 標準曲線法：取若干試管或96孔板，如下操作以分光光度法為例。選用1cm的石英比色皿，在280nm處以第1管作為調零點，分別檢測各管吸光度，以A280為縱坐標，以蛋白質濃度為橫坐標，繪制標準曲線。
試管號 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 |
蛋白標準(1mg/ml) | 0 | 0.5 | 1.0 | 1.5 | 2.0 | 2.5 | 3.0 | 4.0 |
蛋白稀釋工作液(ml) | 4.0 | 3.5 | 3.0 | 2.5 | 2.0 | 1.5 | 1.0 | 0 |
蛋白濃度(mg/ml) | 0 | 0.125 | 0.250 | 0.375 | 0.500 | 0.625 | 0.750 | 1.000 |
取1ml待測蛋白加至3ml的蛋白稀釋工作液中，混勻，分光光度計或酶標儀測定A280。根據(jù)標準曲線計算出樣品的蛋白濃度。
3、 Lowry-Kalckar法(又稱280nm和260nm吸收差法)：對于含有核酸的蛋白質，無需制作標準曲線。以蛋白稀釋工作液作為調零點，取1ml待測蛋白加至3ml的蛋白稀釋工作液中，混勻，分光光度計或酶標儀測定A280 和A260。根據(jù)經(jīng)驗公式計算出待測樣品的蛋白濃度，如果蛋白濃度過高應用蛋白稀釋工作液稀釋后再行檢測。
蛋白質濃度(g/L)=1.45×A280-0.74×A280
4、 Waddell法(又稱215nm和225nm吸收差法)：對于蛋白質含量較少的溶液，適用于該法。取若干試管或96孔板，如下操作以分光光度法為例。以蛋白稀釋工作液作為調零點，取1ml蛋白標準(1mg/ml)加至3ml的蛋白稀釋工作液中，混勻，分光光度計或酶標儀測定A215 和A225。以215nm與225nm吸光度值之差(D=A215-A225)為縱坐標，以蛋白濃度為橫坐標，繪制標準曲線，再測出未知樣品的吸收差，即可由標準曲線查出未知樣品的蛋白質濃度。或者不用制作標準曲線，直接按照如下經(jīng)驗公式計算：
蛋白質濃度(g/L)=144×(A215-A225)。
注意事項：
1.蛋白標準(BSA)粉末溶解于蛋白稀釋工作液，該液中含有防腐劑，不影響后續(xù)檢測，該蛋白標準液-20℃保存。
2.待測蛋白溶解于什么樣的稀釋液中，蛋白標準也宜溶解于什么樣的稀釋液中，否者待測蛋白與蛋白標準中所含非蛋白成分不一致，有可能導致測定不準確。
3.如果沒有分光光度計，也可以使用酶標儀測定，但應考慮根據(jù)比色皿的最小檢測體積。
4.為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
有效期： 12個月有效。蛋白標準配制成溶液后應-20℃凍存。
NobleRyder 紫外法蛋白定量試劑盒
